Свободные лямбда цепи норма
Обновлено: 05.07.2024
Определение каппа- и лямбда-цепей в человеческой сыворотке играет важную роль при диагностике и определении типа моноклональных гаммопатий.
В то время как в поликлональных иммуноглобулинах (при нормальных или повышенных концентрациях) проявляются лёгкие цепи как каппа-, так и лямбда-типа в примерном соотношении 2:1, в моноклональных иммуноглобулинах проявляется лёгкая цепь только одного типа. Повышенный синтез моноклональных иммуноглобулинов или их свободных лёгких цепей, приводящий к выходящему за пределы нормы соотношению каппа- и лямбда-цепей, указывает на моноклональную гаммопатию.
Измерение реакции антиген – антитело методом по конечной точке.
Состав реагентов
Фосфат-буферизованный физиологический раствор (pH 7,43)
Поликлональные козьи антитела к человеческой лёгкой лямбда-цепи (3 мг/мл) (могут варьировать)
Азид натрия (0,95 г/л)
Фосфат-буферизованный физиологический раствор (pH 7,43)
Полиэтиленгликоль (60 г/л)
Азид натрия (0,95 г/л)
Подготовка и стабильность реагентов
Подготовка реагентов:
Реагенты поставляются в жидком виде и готовы к использованию.
Условия и срок хранения:
Реагенты стабильны до окончания срока годности при хранении при 2 – 8 °C. В роторе прибора стабильность реагентов составляет 4 недели при условии отсутствия загрязнений. Реагенты не замораживать!
Дополнительные необходимые реагенты
0,9 % раствор хлорида натрия (9 г/л).
Калибраторы и контрольные пробы в крови:
Калибратор специфических белков (высокий), 1 мл
Калибратор специфических белков (5 уровней), 5 мл
Контрольная сыворотка для специфических белков (низкий уровень), 1 мл
Контрольная сыворотка для специфических белков (высокий уровень), 1 мл
Представляют собой жидкую стабилизированную смесь человеческих сывороток. Содержат 0,95 г/л азида натрия. Номинальные значения указаны в прилагаемом вкладыше.
Забор проб
Использовать свежую сыворотку. Если тест не может быть выполнен в день забора пробы, сыворотка может храниться до 48 часов при 2 – 8 °C. Для более длительного хранения пробу следует заморозить.
Адаптации набора к анализаторам для клинической химии высылаются по запросу.
Процедура тестирования вручную
Проба/Контроль: Развести в соотношении 1:10 физиологическим раствором (с концентрацией 9 г/л).
Калибровочная кривая: Построить калибровочную кривую, приготовив разведения белкового калибратора в соотношениях
1:10, 1:20, 1:40, 1:80 и 1:160 физиологическим раствором с концентрацией 9 г/л. В случае построение калибровочной кривой из набора калибраторов для специфических белков, калибраторы разводят 1:10. Для нулевой точки использовать чистый физиологический раствор с концентрацией 9 г/л.
Тестирование: Смешать 20 мкл разведённых проб, калибраторов и контрольных сывороток с 900 мкл буфера. Измерить оптическую плотность (ОП 1 ) проб, калибраторов и контрольных сывороток при 340 нм. Внести 70 мкл антисыворотки, перемешать и инкубировать 5 минут при комнатной температуре. Повторно измерить оптическую плотность (ОП 2 ) проб, калибраторов и контрольных сывороток при 340 нм.
М-градиент (панель антисывороток: IgG, IgA, IgM, каппа, лямбда) — метод диагностики моноклональных гаммапатий (миеломная болезнь, макроглобулинемия Вальденстрема (IgM), амилоидоз, болезнь легких и тяжелых цепей и др.).
Лабораторная диагностика моноклональных гаммапатий
При некоторых опухолевых заболеваниях клеток крови, в частности плазмоцитов, эти клетки начинают вырабатывать иммуноглобулины одного класса (моноклональные) и их фрагменты (тяжелые и легкие цепи). В норме плазматические клетки вырабатывают различные классы иммуноглобулинов — IgG, IgA, IgM, IgE, IgD. При опухолевом перерождении плазматических клеток они начинают вырабатывать какой-то один тип иммуноглобулина (моноклон) и их цепи. Поэтому парапротеины в крови или в моче являются маркерами ряда онкологических заболеваний. При проведении электрофореза моноклональные иммуноглобулины после окраски на фореграмме будут представлены, так называемым М-градиентом (М-пиком/парапротеином). М-градиент — зона концентрации иммуноглобулинов (их фрагментов) в определенной зоне электрофореграммы крови или мочи. Идентификация иммуноглобулинов (парапротеинов) в данном методе происходит при помощи антисывороток (антител) против тяжелых цепей иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM, каппа и лямбда цепей. Количественное определение полученных пиков проводится при помощи денситометрии электрофореграммы.
Разновидности миеломной болезни по типу выявляенных парапротеинов
По виду синтезируемых парапротеинов (иммуноглобулинов и их фрагментов) выделяют несколько разновидностей миеломной болезни. Чаще встречается G-миелома (в 50% случаев миеломы), когда в крови обнаруживается парапротеин, представленный иммуноглобулином класса G (IgG). Белок Бенс-Джонса (каппа и лямбда цепи) определяются 20% при миеломе. А-миелома, когда выявляется парапротеин, представленный иммуноглобeлином класса А( IgA), обнаруживается в 20% случаев. Выделяют также и М-миелому, представленную иммуноглобулином класса IgM. Встречается несекретирующая миелома, при которой синтеза парапротеинов не происходит.
Парапротеины выявляются при следующих онкогематологических заболеваниях: миеломная болезнь (наиболее часто), лимфома, макроглобулинемия Вальденстрема, плазмоцитома, болезнь тяжелых цепей, миеломы IgE и IgD.
Множественная миелома — гематоонкологическое злокачественное заболевание плазматических клеток (клеток крови), которые продуцируют антитела. Клетки, бесконтрольно размножаясь, инфильтрируют органы и ткани, приводя к нарушению их функций. Процесс протекает преимущественно в костном мозге. Макроглобулинемия Вальденстрема - лимфома, продуцирующая иммуноглобулин IgM класса. Болезнь тяжелых цепей (α, γ, δ, μ, ε) - редкое лимфопролиферативное заболевание, характеризующееся повышенным синтезом тяжелых цепей иммуноглобулинов. Болезнь легких цепей (белок Бенс-Джонса) - один из видов множественной миеломы по характеру вырабатываемых свободных легких цепей (каппа и лямбда). Миеломы IgE и IgD типов выявляются редко.
Схематическая диаграмма типичного антитела, показывающая две тяжелые цепи Ig (синий), связанные дисульфидными связями с двумя легкими цепями Ig (зеленый). Показаны постоянная (C) и переменная (V) области.
Молекула антитела. Две тяжелые цепи окрашены в красный и синий цвет, а две легкие цепи - в зеленый и желтый. См. Также: [1]
Легкая цепь иммуноглобулина является небольшим полипептидом субъединицей антитела (иммуноглобулин).
Типичное антитело состоит из двух тяжелых цепей иммуноглобулина (Ig) и двух легких цепей Ig.
СОДЕРЖАНИЕ
В людях
У человека есть два типа легкой цепи:
- каппа (κ) цепь, кодируемая локусом каппа иммуноглобулина (IGK @) на хромосоме 2
- лямбда (λ) цепь, кодируемая лямбда-локусом иммуноглобулина (IGL @) на хромосоме 22
Антитела продуцируются В-лимфоцитами , каждый из которых экспрессирует только один класс легкой цепи. После установки класс легкой цепи остается фиксированным на протяжении всей жизни В-лимфоцита. У здорового человека общее соотношение каппа-лямбда составляет примерно 2: 1 в сыворотке (измерение интактных целых антител) или 1: 1,5 при измерении свободных легких цепей, при этом соотношение сильно различается, что указывает на новообразование .
Точное нормальное соотношение каппа и лямбда, согласно новому поликлональному анализу свободных легких цепей, составляет от 0,26 до 1,65. И каппа, и лямбда-цепи могут увеличиваться пропорционально, сохраняя нормальное соотношение. Обычно это свидетельствует не о дискразии клеток крови, а о чем-то другом, например о заболевании почек.
У других животных
Гены легкой цепи иммуноглобулина у четвероногих можно разделить на три отдельные группы: каппа (κ), лямбда (λ) и сигма (σ). Расхождение изотипов κ, λ и σ предшествовало излучению четвероногих . Изотип σ был утерян после эволюции линии земноводных и до появления линии рептилии.
Другие типы легких цепей могут быть обнаружены у низших позвоночных , такие как цепь Ig-Light-Iota у Chondrichthyes и Teleostei .
Верблюды уникальны среди млекопитающих, поскольку у них также есть полнофункциональные антитела, которые имеют две тяжелые цепи, но не имеют легких цепей, обычно связанных с каждой тяжелой цепью.
Акулы также обладают в рамках своей адаптивной иммунной системы функциональной гомодимерной антителоподобной молекулой тяжелой цепи, называемой IgNAR (рецептор нового антигена иммуноглобулина). Считается, что IgNAR никогда не имел ассоциированной легкой цепи, вопреки пониманию того, что антитела, содержащие только тяжелые цепи, у верблюдовых, возможно, потеряли своего партнера по легкой цепи в результате эволюции.
Состав
В типичном антителе присутствует только одна легкая цепь, поэтому две легкие цепи отдельного антитела идентичны.
Каждая легкая цепь состоит из двух тандемных иммуноглобулиновых доменов :
- одна постоянная (C L ) область
- один вариабельный домен (V L ), который важен для связывания антигена
Примерная длина белка легкой цепи составляет от 211 до 217 аминокислот . Константная область определяет, к какому классу (каппа или лямбда) относится легкая цепь. Лямбда-класс имеет 4 подтипа ( 1 , 2 , 3 и 7 ). λ λ λ λ
В патологии
Отдельные В-клетки в лимфоидной ткани обладают либо каппа-, либо лямбда-легкими цепями, но никогда не обоими вместе. Специфическая перестройка легкой цепи лямбда иммуноглобулинов может привести к потере некоторых генов, кодирующих белок, что, по-видимому, не имеет функционального значения (в то время как функционально значимая miR-650 может быть сверхэкспрессирована). С помощью иммуногистохимии можно определить относительное количество В-клеток, экспрессирующих легкие цепи каппа и лямбда. Если лимфатический узел или подобная ткань является реактивным или иным образом доброкачественным, он должен содержать смесь каппа-положительных и лямбда-положительных клеток. Однако, если один тип легкой цепи встречается значительно чаще, чем другой, вероятно, все клетки происходят из небольшой клональной популяции, что может указывать на злокачественное состояние, такое как В-клеточная лимфома .
Легкие цепи Ig, образующиеся в неопластических плазматических клетках, например, при множественной миеломе , называются белками Бенс-Джонса .
Повышенные уровни свободных легких цепей Ig также были обнаружены при различных воспалительных заболеваниях. Важно отметить, что, в отличие от повышенных уровней у пациентов с лимфомой, эти легкие цепи Ig являются поликлональными. Недавние исследования показали, что эти легкие цепи Ig могут связываться с тучными клетками и, используя их способность связывать антиген, облегчать активацию этих тучных клеток (Redegeld (2002)) . Активация тучных клеток приводит к высвобождению различных провоспалительных медиаторов, которые, как полагают, способствуют развитию воспалительного заболевания. Недавние исследования показали, что легкие цепи Ig активируют не только тучные клетки, но также ганглии задних корешков (Rijnierse, 2009) и нейтрофилы (Braber and Thio (2012)) , что расширяет их возможную роль в качестве медиаторов воспалительных заболеваний.
Альтернативные названия: Свободные легкие цепи иммуноглобулинов в крови, Легкие каппа- и лямбда-цепи в ликворе
Информация об исследовании
Свободные цепи — это белки, вырабатываемые иммунными клетками, называемыми плазменными клетками. Также называемые легкими цепями каппа и лямбда, они связываются с другими белками (тяжелыми цепями), образуя иммуноглобулины (также известные как антитела), которые нацелены и нейтрализуют конкретные угрозы для организма, такие как бактерии и вирусы.
Плазменные клетки обычно производят некоторые избыточные легкие цепи, которые не сочетаются с тяжелыми цепями, а вместо этого попадают в кровоток. Свободные цепи (FLC) или безсывороточные легкие цепи (SFLC) относятся к тем, которые не являются частью целых (неповрежденных) иммуноглобулинов и присутствуют в крови. Этот анализ измеряет количество свободных световых цепей каппа и лямбда в крови и рассчитывает соотношение показателей, чтобы помочь обнаружить, диагностировать и контролировать состояния, связанные с увеличением производства свободных цепей.
Сведения о иммуноглобулине
Каждый тип иммуноглобулина состоит из четырех белковых цепочек: двух одинаковых тяжелых цепочек и двух одинаковых легких цепей. Конкретная плазменная клетка будет вырабатывать только один тип иммуноглобулина. Обычно образуется небольшой избыток свободных легких цепей, поэтому в крови обнаруживаются низкие уровни свободных каппы и лямбда-цепей. С группой состояний, называемых расстройствами плазматических клеток или моноклональными гаммапатиями, плазматическая клетка становится опухолевой, разделяя больше, чем должна, и производя большое количество копий (клонов) самой себя, которые вытесняют другие клетки из костного мозга. Поскольку клоны поступают из одной плазматической клетки, они могут производить большое количество одного и того же типа аномального моноклонального иммуноглобулина (белка).
Исследование SFLC
Тестирование безсывороточной легкой цепи (SFLC) предназначено для выявления, диагностики и мониторинга нарушений плазматических клеток, включая множественную миелому, первичный амилоидоз и связанные с ними заболевания, или для мониторинга эффективности лечения. При группе состояний, называемых расстройствами плазменных клеток или моноклональными гаммапатиями, плазматическая клетка становится неопластической, по количеству больше, чем должна быть, и производит большое количество аномального моноклонального иммуноглобулина (М-белка).
Этот белок может быть неповрежденным иммуноглобулином или только одним из его компонентов, каппа или лямбда легкой цепью, или редко тяжелой цепью. Расстройства плазменных клеток регулярно диагностируются с помощью тестов на электрофорез сыворотки и белка мочи, за которыми следуют тесты иммунофиксационного электрофореза для определения того, какой иммуноглобулин присутствует в избытке. Анализы крови также могут быть заказаны для измерения уровней неповрежденных иммуноглобулинов (например, IgG, IgM, IgA).
Когда проводится исследование?
Тестирование легкой цепи без сыворотки и соотношение каппы и лямбды заказываются вместе с анализом на электрофорез белка, когда есть признаки и симптомы, которые, как подозревает лечащий врач, связаны с расстройством плазматических клеток. Эти признаки и симптомы будут варьироваться и, как правило, ухудшаются с течением времени. Они включают в себя различные части организма:
костная система: боль, переломы из-за пролиферации плазматических клеток в костном мозге;
кровь: анемия и частые инфекции из-за низкого уровня нормальных эритроцитов и лейкоцитов, плазменные клетки вытесняют другие типы клеток в костном мозге, что приводит к снижению показателей крови;
почки: производство аномального количества легких цепей может привести к увеличению свободных цепей в моче (белок Бенса-Джонса), эти белки могут привести к повреждению почек.
Врач может также рекомендовать сдать этот анализ, когда есть признаки и симптомы, связанные с первичным амилоидозом. Амилоидоз развивается, когда аномальные белки накапливаются в органах или ткани, особенно в сердце, печени, почках, селезенке, желудочно-кишечном тракте и нервной системе.
При первичном амилоидозе белки являются свободными световыми цепями. В зависимости от нарушения плазменных клеток и того, какие органы затронуты, у человека могут быть различные симптомы, такие как: боли в костях; слабость, усталость; онемение, слабость или покалывание рук и ног; отек лодыжек и ног; одышка, затрудненное дыхание; нерегулярное сердцебиение; легкие синяки. При диагностике расстройства плазматических клеток анализ может быть заказан периодически для мониторинга состояния и оценки эффективности лечения.
Исследование крови на свободные лямбда-цепи иммуноглобулинов в сыворотке назначается при:
диагностике и оценке прогноза и контроля лечения моноклональных гаммапатий (множественной миеломы, первичного амилоидоза, моноклональной гаммапатии неясного значения) и некоторых других лимфопролиферативных заболеваний;
подозрении на множественную миелому или другие заболевания из группы моноклональных гаммапатий;
оценке прогноза некоторых В-клеточных лимфом.
Метод исследования: иммуноферментный анализ (ИФА).
Материал исследования: венозная кровь. В Москве сдать анализ на лямбда цепи иммуноглобулинов можно в лабораториях по предварительной записи на сайте. Возможен вызов специалиста на дом для забора биоматериала.
Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования. Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования. Не курить в течение 30 минут до исследования.
Свободные лямбда-цепи иммуноглобулинов в сыворотке: 3.25 – 28.05 мкг/мл
Возможные причины повышения: множественная миелома; первичный системный амилоидоз; солитарная плазмоцитома; моноклональная гаммапатия неясного значения; хронический лимфолейкоз; В-клеточная лимфома; заболевания почек; инфекционные заболевания; аутоиммунные заболевания.
Результаты анализа придут на указаную вами почту.
Так же можно получить бумажную копию непосредственно в медицинском центре.
Читайте также: